Uji toksisitas isolat steroid fraksi n-butanol ekstrak metanol alga merah (Eucheuma cottonii) dengan metode BSLT (brine shrimp lethality test)

ABSTRAK:

Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui toksisitas senyawa steroid yang diisolasi dari alga merah (Eucheuma cottonii) beserta identifikasinya. Ekstraksi Eucheuma cottonii dilakukan menggunakan metanol. Ekstrak pekat metanol kemudian dihidrolisis dengan HCl dan dipartisi menggunakan n-butanol. Hasil partisi diuji secara fitokimia dan dipisahkan dengan KLT preparatif menggunakan pelarut n-heksana:etil asetat (17:3). Isolat steroid yang diperoleh kemudian digunakan untuk uji toksisitas terhadap larva udang Artemia salina L. dengan metode BSLT dan diidentifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis, FTIR dan LC-MS/MS. Hasil penelitian menunjukkan rendemen hasil ekstraksi maserasi sebesar 14,5615% dan rendemen hasil partisi dengan n-butanol sebesar 17,614%. Pemisahan dengan KLT preparatif menghasilkan 12 spot dengan 2 spot diduga steroid (isolat 9 dan 10). Uji toksisitas dari ekstrak kasar metanol, fraksi n-butanol, isolat 9 dan isolat 10 menghasilkan LC50 secara berturut-turut sebesar 64,2192; 59,1672; 52,2105 dan 54,0222 ppm. Identifikasi menggunakan UV-Vis menunjukkan panjang gelombang maksimum 203 nm, 204 nm dan 266 nm. Identifikasi menggunakan FTIR menunjukkan adanya gugus O-H, C=C, C-OH, gemdimetil dan =C-H siklik yang diduga steroid. Identifikasi dengan LC-MS/MS menunjukkan 2 jenis steroid yaitu senyawa eplerenon dan nandrolon benzoate.

ABSTRACT:

This study aims to identify and determine the toxicity of steroid compounds isolated from red algae (Eucheuma cottonii). Extraction of Eucheuma cottonii using methanol. And then, hydrolyzed of concentrated methanol extract with HCl and partitioned using n-butanol. The result of the partition was tested phytochemically and separated using TLC-preparative with n-hexane:ethyl acetate (17:3) as eluent. The steroid isolates then used for toxicity test of shrimp larvae Artemia salina L. using the BSLT methods and identified with spectrophotometer UV-Vis, FTIR and LC-MS/MS. The result showed that the yield of maceration was 14,5615% and the yield of partition with n-butanol was 17,614%. Separation using TLC-Preparative produced 12 spots with 2 spots suspected of being steroids (isolate 9 and isolate 10). The toxicity test from crude extract of methanol, n-butanol fraction, isolate 9 and isolat 10 produced LC50 in a row of 64,2192; 59,1672; 52,2105 and 54,0222 ppm. Identification using UV-Vis showing the maximum wavelength at 203 nm, 204 nm, and 266 nm. Identification using FTIR showing the O-H group, C=C, C-OH, gemdimethyl and =C-H cyclic that suspected steroids. Identification using LC-MS/MS showing 2 type steroids namely eplerenone and nandrolone benzoate.

مستخلص البحث

هدف هذا البحث إلى تحديد سمية مركب الستيرويد المعزولة من الطحالب الحمراء (Eucheuma cottonii) وتحديد هويتها. تم استخراج الطحالب الحمراء باستخدام الميثانول. ثم تحلل مستخرج الميثانول المركز باستخدام حمض الهيدروكلوريك وتقسيمه باستخدام ن بوتانول. وتم اختبار نتائج التقسيم كيميائيا نباتيا وفصلها باستخدام الاستشراب اللوني التحضيري بالطبقة الرقيقة باستخدام المذيب ن هكسان : خلات الإيثيل (٣:١٧). ثم استخدام عزل الستيرويد الذي تم الحصول عليها لإجراء اختبار السمية على يرقات الربيان الملحي (Artemia salina L.) باستخدام طريقة اختبار فتك الروبيان الملحي وتم تحديدها باستخدام مقاييس الطيف الضوئي UV-Vis و FTIR و LC-MS/MS. أظهرت نتائج البحث تعديلا في نتائج مستخرج النقع بنسبة ١٤.٥٦١٥ %، ونتائج التقسيم مع ن بوتانول بنسبة ١٧.٦١٤ %. أدى الفصل مع الاستشراب اللوني التحضيري بالطبقة الرقيقة إلى ١٢ بقعة ؛ بقعتان من المنشطات المشتبه بها (المعزولات ٩ و ١٠). وأسفر اختبار سمية مستخرج الميثانول الخام، وجزء ن بوتانول، والمعزولات ٩ و ١٠ عن LC50 على التوالي بقيمة ٦٤.٢١٩٢؛ ٥٩.١٦٧٢؛ ٥٢.٢١٠٥ و ٥٤.٠٢٢٢ ففم. أظهر تحديد الهوية باستخدام UV-Vis أطوال موجية قصوى تبلغ ٢٠٣ نانومتر و ٢٠٤ نانومتر و ٢٦٦ نانومتر. أشار تحديد الهوية باستخدام FTIR إلى وجود مجموعات دورية O-H و C = C و C-OH و GEMDIMETHYL و = C-H مما يشبه أنها السيترويد. وأما تحديد الهوية باستخدام LCMS/MS فبينت على نوعين من الستيرويد، وهما مركب إبليرينون و مركب ناندرولون بنزوات.