Aktivitas antioksidan isolat steroid hasil kltp fraksi etil asetat dan petroleum eter hasil hidrolisis ekstrak metanol hydrilla verticillata

ABSTRAK

Steroid merupakan salah satu metabolit sekunder yang memiliki potensi sebagai antioksidan yang dapat menghambat radikal bebas. Salah satu tumbuhan yang memiliki kandungan steroid di dalamnya yaitu Hydrilla verticillata. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan isolat steroid yang diperoleh dari hasil kromatografi lapis tipis preparatif (KLTP) fraksi etil asetat (EA) dan petroleum eter (PE) H. verticillata beserta identifikasinya menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Sampel hydrilla diperoleh dari Danau Ranu Grati Pasuruan. Komponen aktif pada sampel diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol p.a. Selanjutnya ekstrak pekat metanol dihidrolisis dengan HCl 2 N dan dipartisi dengan dua variasi pelarut yaitu etil asetat dan petroleum eter. Hasil partisi diuji fitokimia menggunakan reagen Liebermann-Burchard dan dipisahkan steroid yang ada dengan metode KLTP menggunakan pelarut n-heksana dan etil asetat (17:3). Isolat steroid hasil KLTP diuji aktivitas antioksidannya menggunakan metode DPPH untuk mengetahui nilai EC50-nya. Selanjutnya diidentifikasi isolat steroid menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Pemisahan KLTP fraksi etil asetat menghasilkan 20 spot dengan 3 spot diantaranya diduga steroid, sedangkan pemisahan KLTP fraksi petroleum eter menghasilkan 19 spot dengan 3 spot diantaranya diduga sebagai steroid. Hasil uji aktivitas antioksidan menunjukkan nilai EC50 sebesar 1901 (isolat 13 EA); 239,8 (isolat 14 EA); 94,92 (isolat 20 EA); 142 (isolat 11 PE); 177,1 (isolat 12 PE); dan 61,43 (isolat 18 PE) ppm. Hasil identifikasi UV-Vis isolat KLTP fraksi etil asetat yaitu isolat 13 EA menunjukkan serapan pada panjang gelombang maksimum (λmaks) 203 nm, isolat 14 EA menunjukkan serapan pada λmaks 204; 221,9; 275 nm, dan isolat 20 EA menunjukkan serapan pada λmaks 204; 221,9 nm. Sedangkan hasil identifikasi UV-Vis isolat KLTP fraksi petroleum eter yaitu isolat 11 PE, isolat 12 PE, dan isolat 18 PE sama-sama menunjukkan serapan pada λmaks 203 nm.

ABSTRACT

Steroids are one of the secondary metabolites which have potential as antioxidant that can inhibit free radicals. One of the plants that contains steroids is Hydrilla verticillata. The aim of this research was to determine the antioxidant activity of steroid isolates obtained from preparative thin layer chromatography of ethyl acetate (EA) and petroleum ether (PE) fraction of H. verticillata and to identify it using UV-Vis spectrophotometer. The sample was obtained from Ranu Grati Lake of Pasuruan. The active compounds in the sample were extracted with maceration method using methanol p.a. solvent. The methanol extract was hydrolyzed using HCl 2 N and partitioned using two variations of the solvents, ethyl acetate and petroleum ether. The partition results were tested for its phytochemical screening for steroid using Liebermann-Burchard reagent and separated its steroid with PTLC method using n-hexane and ethyl acetate (17:3) eluent. The steroid isolates from PTLC results were tested for its antioxidant activity using DPPH method to measure the EC50 value. Then the steroid isolates were identified using UV-Vis spectrophotometer. The PTLC separation of ethyl acetate fraction showed that there were 20 spots which 3 of them were suspected as steroid. While the PTLC separation of petroleum ether fraction showed that there were 19 spots which 3 of them were suspected as steroid. The result of antioxidant activity assay showed the EC50 of 1901 (isolate 13 EA); 239.8 (isolate 14 EA); 94.92 (isolate 20 EA); 142 (isolate 11 PE); 177.1 (isolate 12 PE); and 61.43 (isolate 18 PE) ppm. The spectrophotometer UV-Vis identification results of the isolates of ethyl acetate fraction showed that there were absorption at the maximum wavelength (λmax) 203 nm in isolate 13 EA, λmax 204; 221.9; 275 nm in isolate 14 EA, and λmax 204; 221,9 nm in isolate 20 EA. While isolate 11, 12, and 18 PE showed the same absorption at λmax 203 nm.

مستخلص البحث

الستيرويد هو مستقلب ثانوي يمكن أن تكون مضادات الأكسدة التي يمكن أن تمنع الجذور الحرة. أحد النباتات التي تحتوي على المنشطات يعني هيدريلا فرتيسيلاتا (Hydrilla verticillata). تهدف هذه الدراسة إلى تحديد النشاط المضاد للأكسدة لعزلات الستيرويد من كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) لكسور أسيتات الإيثيل (EA) و أثير البترول (PE) من هيدريلا فرتيسيلاتا (Hydrilla verticillata) و تحديدها باستخدام مقياس الطيف الضوئي (UV-Vis). تم الحصول على عينات الهيدريلا من بحيرة رانو جراتي باسوروان. تم استخلاص المكون النشط في العينة بطريقة النقع باستخدام الميثانول p.a.. ثم تم تحلل مستخلص الميثانول المركز مع 2 عيار HCl 2 N و تقسيمه بنوعين مختلفين من المذيبات ، و هما أسيتات الإيثيل و إيثر البترول. تم اختبار نتائج التقسيم للكيمياء النباتية باستخدام كاشف ليبرمان - بورشارد (Liebermann-Burchard) و تم فصل المنشطات الموجودة بطريقة كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) باستخدام مذيبات ن الهكسان (n-heksana) و إيثيل الأسيتات (17: 3). تم اختبار عزلات الستيرويد الناتجة من كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) من أجل نشاطها المضاد للأكسدة باستخدام طريقة 2،2 - ثنائي فينيل -1 بيكريل هيدرازيل (DPPH) لتحديد قيمة EC50. علاوة على ذلك ، تم التعرف على عزلات الستيرويد باستخدام مقياس الطيف الضوئي (UV-Vis). أدى فصل كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) عن جزء أسيتات الإيثيل إلى 20 بقعة يشتبه في 3 منها أنها ستيرويدات ، بينما أدى فصل كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) لجزء الأثير البترولي إلى 19 بقعة مع 3 نقاط يشتبه في أنها منشطات. أظهرت نتائج اختبار النشاط المضاد للأكسدة قيمة EC50 تبلغ 1901 (عزل 13 EA) ؛ 239.8 (عزل 14 EA) ؛ 94.92 (عزل 20 EA) ؛ 142 (11 عزلة PE) ؛ 177.1 (12 عزلة PE) ؛ و 61.43 (عزل 18 PE) جزء في المليون. أظهرت نتائج تحديد الأشعة المرئية وفوق البنفسجية لجزء أسيتات الإيثيل المعزول كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) ، أي عزلة 13 EA ، امتصاصًا بطول موجة 203 (λ) نانومتر ، وأظهرت العزلة 14 EA امتصاصًا عند 204 λ ؛ 221.9 ؛ 275 نانومتر ، و 20 EA أظهرت امتصاص عند 204 λ ؛ 221.9 نانومتر. و في الوقت نفسه ، أظهرت نتائج التعرف على الأشعة فوق البنفسجية - فيس لعزلات كروماتوجرافيا الطبقة الرقيقة التحضيرية (KLTP) مع كسر الأثير البترولي ، أي عزلة 11 PE و عزلة 12 PE و عزلة 18 PE تمتص عند 203 نانومتر.