Konstruksi dan ekspresi protein kapsid Porcine circovirus 3 (PCV3) sebagai kandidat dalam produksi vaksin subunit secara in vitro

INDONESIA:

Babi merupakan komoditas peternakan dengan nilai ekonomi dan permintaan pasar yang tinggi pada beberapa negara industri babi. Namun, babi rentan terhadap penyakit yang menyebabkan kerugian, salah satunya yaitu infeksi virus Porcine circovirus 3 (PCV3). PCV3 secara khusus menginfeksi saluran pernafasan dan organ dalam hingga dapat menyebabkan komplikasi pada babi. Penelitian ini bertujuan untuk mengkonstruksi gen ORF2 (gen yang mengkode protein kapsid) dan menguji ekspresinya dengan metode Immunofluorescence Assay (IF Assay) dan Western Blot. Rangkaian konstruksi pada penelitian ini dapat dijadikan model penelitian subunit vaksin yang dapat diterapkan untuk penanganan penyakit pada manusia. Penelitian ini merupakan penelitian deskriptif kualitatif yang didesain sebagai true experimental dengan post-test only control group yang terdiri atas sampel positif sebagai subjek penelitian dan dibandingkan dengan sampel negatif. Konstruksi genetik dilakukan dengan amplifikasi menggunakan PCR dan disisipkan ke dalam plasmid pVAX1. Ekspresi protein PCV3 diuji pada sel HEK293A (Human Embryonic Kidney) dengan pengujian Immunofluorescence Assay dan sel Escherichia coli BL21 dengan pengujian Western Blot. Hasil penelitian menunjukkan konstruksi genetik pada PCV3 berhasil dilakukan dengan hasil amplifikasi panjang fragmen berukuran 0,9 Kb. Sedangkan hasil IF Assay menunjukkan bahwa protein kapsid terekspresi pada sel HEK293A yang ditunjukkan dengan sinyal fluoresensi berwarna merah. Selain itu, protein kapsid juga terekspresi pada sel Escherichia coli BL21 yang terdeteksi pada pengujian Western Blot memiliki ukuran berat molekul 27 kDa. Oleh karena itu, hasil penelitian ini dapat dijadikan dasar pemahaman mengenai efektifitas subunit vaksin melalui hasil ekspresi protein. Protein yang didapatkan dari rangkaian penelitian ini dapat dijadikan kandidat untuk penelitian selanjutnya yaitu pengujian produksi subunit vaksin dan pengujiannya terhadap hewan coba.

ENGLISH:

Pigs are a farm commodity with economic value and high market demand in several pig- producing countries. However, pigs are susceptible to diseases that cause losses, one of which is the Porcine circovirus 3 (PCV3) virus infection. PCV3 specifically infects the respiratory tract and internal organs, which can cause complications in pigs. This study aims to construct the ORF2 gene (the gene that encodes the capsid protein) and test its expression using the Immunofluorescence Assay (IF Assay) and Western Blot methods. The construction series in this study can be used as a model for subunit vaccine research that can be applied to treat diseases in humans. This study is a qualitative descriptive study designed as a true experiment with a post-test only control group consisting of positive samples as research subjects and compared with negative samples. Genetic construction was carried out by amplification using PCR and inserted into the pVAX1 plasmid. PCV3 protein expression was tested in HEK293A (Human Embryonic Kidney) cells using the Immunofluorescence Assay and Escherichia coli BL21 cells using the Western Blot test. The results of the study showed that the genetic construction of PCV3 was successful with a 0.9 kb fragment amplification. Meanwhile, the IF Assay results showed that the capsid protein was expressed in HEK293A cells, indicated by a red fluorescence signal. Furthermore, the capsid protein was also expressed in Escherichia coli BL21 cells, detected in Western Blot testing with a molecular weight of 27 kDa. Therefore, the results of this study can be used as a basis for understanding the effectiveness of vaccine subunits through protein expression results. The proteins obtained from this series of studies can be used as candidates for further research, namely testing the production of vaccine subunits and testing them on experimental animals.

ARABIC:

تُعدّ الخنازير سلعة حيوانية ذات قيمة اقتصادية وطلب سوقي مرتفع في العديد من الدول المنتجة لها. مع ذلك، تُعدّ الخنازير عرضةً للأمراض التي تُسبب خسائر، ومنها عدوى فيروس الخنازير الدائري 3 (PCV3). يُصيب فيروس PCV3 الجهاز التنفسي والأعضاء الداخلية تحديدًا، مما قد يُسبب مضاعفات خطيرة للخنازير. تهدف هذه الدراسة إلى بناء جين ORF2 (الجين المسؤول عن ترميز بروتين الغلاف) واختبار تعبيره باستخدام تقنيتي فحص التألق المناعي (IF Assay) والتلطيخ الغربي (Western Blot). يُمكن استخدام سلسلة البناء الجيني في هذه الدراسة كنموذج لأبحاث لقاحات الوحدات الفرعية التي يُمكن تطبيقها لعلاج الأمراض لدى البشر. هذه الدراسة وصفية نوعية، مصممة كتجربة حقيقية مع مجموعة تحكم بعد الاختبار فقط، تتكون من عينات إيجابية كعينات بحثية، ومقارنتها بعينات سلبية. تم البناء الجيني عن طريق التضخيم باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وإدخاله في بلازميد pVAX1. تم اختبار التعبير البروتيني لفيروس PCV3 في خلايا HEK293A (خلايا الكلى الجنينية البشرية) باستخدام فحص التألق المناعي، وفي خلايا الإشريكية القولونية BL21 باستخدام اختبار ويسترن بلوت. أظهرت نتائج الدراسة نجاح البناء الجيني لفيروس PCV3 بتضخيم قطعة بطول 0.9 كيلوبايت. في الوقت نفسه، أظهرت نتائج فحص التألق المناعي التعبير عن بروتين الغلاف في خلايا HEK293A، كما يتضح من إشارة التألق الأحمر. علاوة على ذلك، تم التعبير عن بروتين الغلاف أيضًا في خلايا الإشريكية القولونية BL21، حيث تم الكشف عنه في اختبار ويسترن بلوت بوزن جزيئي قدره 27 كيلو دالتون. لذلك، يمكن استخدام نتائج هذه الدراسة كأساس لفهم فعالية وحدات اللقاح الفرعية من خلال نتائج التعبير البروتيني. يمكن استخدام البروتينات التي تم الحصول عليها من هذه السلسلة من الدراسات كمرشحات لمزيد من الأبحاث، وتحديدًا لاختبار إنتاج وحدات اللقاح الفرعية واختبارها على الحيوانات المخبرية.