Variasi komposisi eluen pada pemisahan senyawa steroid dan triterpenoid terhadap fraksi etil asetat alga merah (Eucheuma spinosum) menggunakan kromatografi kolom

ABSTRAK

Alga Merah (Eucheuma spinosum) merupakan tanaman laut yang mengandung senyawa metabolit sekunder seperti steroid dan triterpenoid. Senyawa ini banyak dimanfaatkan sebagai senyawa antioksidan, antibakteri, dan antimikroba. Tujuan penelitian ini untuk memisahkan senyawa steroid dan triterpenoid pada alga merah E.spinosum menggunakan kromatografi kolom variasi komposisi eluen n-heksana:etil asetat (16:4); (17:3) dan (18:2).

Ekstraksi senyawa aktif menggunakan metode maserasi dengan pelarut metanol, hidrolisis dengan HCl 2N dan partisi dengan etil asetat. Fraksi etil asetat diuji menggunakan reagen Liberman Burchard (LB) dan dipisahkan menggunakan kromatografi kolom variasi komposisi eluen. Fraksi hasil elusi dimonitoring dengan KLTA selanjutnya isolat tunggal steroid dan triterpenoid dari variasi komposisi eluen terbaik diidentifikasi menggunakan Ultraviolet-Visible (UV-Vis) dan Fourier Transform Infra Red (FT-IR). Isolat steroid diidentifikasi lebih lanjut dengan Liquid Chromatograph-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS).

Hasil penelitian menunjukan kadar air kering E.spinosum sebesar 9,263%, ekstrak metanol 5,0713%, dan hasil partisi diperoleh 18,247%, hasil uji LB diperoleh warna hijau dan cincin merah kecoklatan, komposisi eluen terbaik yaitu n-heksana:etil asetat (18:2) dengan diperoleh 1 steroid fraksi C2(23-55) dengan randemen 29,5%, 2 fraksi triterpenoid C4(68-95) dan C6(116-185) dengan randemen 4,7 dan 7,2%. Hasil identifikasi UV-Vis diperoleh panjang gelombang isolat steroid 204 nm, dan isolat triterpenoid 205,1 nm dan 204,9 nm. Hasil identifikasi FTIR diperoleh fraksi steroid dengan gugus fungsi O–H, Csp3–H, C=C non konjugasi, –CH2, –C(CH3)2, C–O alkohol sekunder, dan =C-H siklik. Isolat triterpenoid diperoleh gugus fungsi O–H, Csp3–H, -CH2-, C=O ester, C=C non konjugasi, -CH2, –C(CH3)2, –C–O ester, C–O alkohol sekunder. Isolat steroid hasil LC-MS/MS diperoleh senyawa stigmasterol dengan (m/z 395, 83), kampesterol (m/z 383, 161), dan β-sitosterol (m/z 397, 161).

ABSTRACT

Red algae (Eucheuma spinosum) is plant in the sea that contains secondary metabolite compound such as steroid and triterpenoid. These compounds are used as antioxidant, antibacteri, and antimicroba. The purpose of this research is isolating steroid and triterpenoid compound in red algae E.spinosum using colomn chromatography with variation composition of eluen n-heksana:ethyl acetate (16:4); (17:3) and (18:2).

The extraction of active compound used maseration method by methanol solvent, hydrolyzed by HCl 2N and partial by ethyl acetate. The fraction of ethyl acetate is analyzed by Liberman Burchad (LB) reagent and separated by colomn chromatography with variation composition eluen. The fraction of elusion result is monitored by TLC then one isolate of steroid and triterpenoid from the best eluen composition variation identificated by Ultraviolet-Visible (UV-Vis) and Fourier Transform Infra Red (FT-IR). Isolate of steroid identificated by Liquid Chromatograph-Tandem Mass Spectrometry (LC-MS/MS).

The result of research shows dry water level E.spinosum is 9,263%, extract of methanol is 5,0713%, and result of partision is 18,247%, result of LB identification is green colour and red ring brownesh, the best eluent composition is n-heksane:ethyl acetate (18:2) with 1 steroid fraction C.2(23-55) and it’s randemen is 29,5%, the randemen of 2 fractions of triterpenoid C.4(68-95) and C.6(116-185) are 4,7 and 7,2%. The result of UV-Vis identification is isolate of steroid wavelength is 204 nm, and isolate of triterpenoid is 205,1 nm and 204,9 nm. The result of FTIR identification is fraction of steroid with function group O–H, Csp3–H, C=C non conjugation, –CH2, –C(CH3)2, C–O alkohol secunder, and =C-H cyclic. The isolate of triterpenoid is function group O–H, Csp3–H, -CH2-, C=O ester, C=C non conjugation, -CH2, –C(CH3)2, –C–O ester, C–O alkohol secunder. The result of isolate steroid by LC-MS/MS is stigmasterol compound (m/z 395, 83), kampesterol (m/z 383, 161), dan β-sitosterol (m/z 397, 161).

مستخلص البحث

الطحالب الحمراء (Eucheuma spinosum) هو النباتات البحرية التي تحتوي على المركبات الثانوية مثل تريترفينويد وستيرويد. هذه المركبات تستخدم كمضادات للاكسدة، مضاد للجراثيم والمكروبات. واما الغرض من هذا البحث للفصل بين المركبات تريترفينويد وسيترويد في الطحالب الحمراء E. spinosum باستخدام اللوني العمود الاختلاف شاطف ن الهكسان: الإيثيل الأسيتات (٤:١٦) ؛ (٣:١٧) و (٢:١٨)

استخراج مركب النشط يستخدم النقع مع الميثانول، وتحلل مع N٢ حمض الهيدروكلوريك والتقسيم مع الإيثيل ا الأسيتات. جزء إيثيل الأسيتات يختبر باستخدام كاشف ليبرمان بورشارد ويفصل باستخدام اللوني العمود الاختلاف الشاطف التكوين. جزء النتائج من شطف اللاحقة مع برقيقة اللوني طبقة التحليلي وعزلت الواحدستيرويد و تريترفينويد من أفضل الاختلافة تحديد باستخدام الأشعة فوق البنفسجية المرئية و التحويل الفورية تحت الحمراء العزلات الستيرويد تحديد أكثر مع اللونى السائل- التحليل الطيفي الثقيل.

أظهرت النتائج البحث محتوى المياه الجافة E.spinosum بقدر ٪ ۹٬٢٦٣، الاستخراج الميثانول ٪ ٥٬۰٧١، حصلت النتائج التقسيم ٪ ١۸٬٢٤٧، ونتائج الاختبار ليبرمان بورشارد حصلت عليها اللون الأخضر وعصابة حمراء، تكوين الشاطف أفضل يعني ن الهكسان: إيثيل الأسيتات (٢:١٨) مع الحصول على جزء الستيرويد (٥٥-٢٣)C2 بعائد ٪ ٢۹٬٥ و ٢ جزء تريترفينويد (۹٥-٦٨) C4و (١۸٥-١١٦) C6 بعائد ٪ ٤٬٧ و ٪ ٧٬٢ . النتائج التحديد المطياف الأشعة فوق البنفسجية المرئية حصلت الطول الموجي العزلات سيترويد ٢۰٤ نانومتر وعزلات تريترفينويد ٢۰٥٬١ نانومتر و ٢۰٤٬۹ نانومتر. النتائج التحديد التحويل الفورية تحت الحمراء حصلت جزء الستيرويد مع مجموعة وظيفية O–H Csp3–H,، C=C غير الاقتران، ,-CH2 –C(CH3)2 C–O الكحول الثانوي و=C-H الدورى. عزلات تريترفينويد حصلت جماعات وظيفية، ,O–H, ,Csp3–H, -CH2-، C=O استير، C=C غير الاقتران،-CH2 ، -C (CH3)2، -C-O استير ، CO الكحول الثانوي ، العزلات السيترويد نتيجة اللونى السائل- التحليل الطيفي الثقيل حصلت ستيغماستيرول مع مركب مع (۸٣ ٣۹٥٬ m/z)، كامفستيرول (١٦١ ٣۸٣٬ m/z)، و β-سيتوستيرول (١٦١ ٣۹٧٬ m/z)