Pemisahan Senyawa Triterpenoid dan Steroid Fraksi Etil Asetat Alga Merah Eucheuma Spinosum menggunakan Kromatografi Kolom Basah dengan variasi ukuran kolom

ABSTRAK

Alga merah Eucheuma spinosum diketahui mengandung senyawa triterpenoid dan steroid yang dapat dimanfaatkan sebagai antioksidan, antibakteri, antikanker, dan sebagainya. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui hasil pemisahan senyawa triterpenoid dan steroid menggunakan kromatografi kolom basah dengan variasi ukuran kolom dan identifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis, FTIR, dan LC-MS/MS.

E. spinosum diekstraksi dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol. Ekstrak metanol dihidrolisis dengan HCl 2N dan dipartisi menggunakan pelarut etil asetat. Fraksi etil asetat diuji dengan reagen Lieberman Burchard. Senyawa triterpenoid dan steroid dalam fraksi etil asetat dipisahkan menggunakan kromatografi kolom basah dengan variasi ukuran kolom 1; 1,5; dan 2 cm. Fraksi yang diperoleh dimonitoring menggunakan KLT Analitik. Isolat triterpenoid dan steroid diidentifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis, FTIR, dan isolat steroid diidentifikasi dengan LC-MS/MS.

Hasil pemisahan senyawa triterpenoid dan steroid dengan kromatografi kolom basah lebih baik menggunakan ukuran kolom 1 cm yang menghasilkan 4 kelompok fraksi tunggal yaitu 3 fraksi triterpenoid (fraksi A.4; A.6; dan A.7) dan 1 fraksi steroid (fraksi A.2). Hasil identifikasi dengan spektrofotometer UV-Vis dan FTIR isolat triterpenoid (fraksi A.4) diduga merupakan golongan asam karboksilat (λmaks 206,9 nm) yang memiliki gugus fungsi OH, C=C, C=O asam karboksilat, C-OH sekunder, dan geminal dimetil. Isolat triterpenoid (fraksi A.6 dan A.7) diduga merupakan golongan ester (λmaks 204 nm) dengan gugus fungsi OH, C=C, C=O ester, C-OH primer, dan geminal dimetil. Isolat steroid (fraksi A.2) diduga merupakan golongan alkohol (λmaks 203 nm) dengan gugus fungsi OH, C=C, C-OH sekunder, dan geminal dimetil. Hasil identifikasi dengan LC-MS/MS pada isolat steroid (fraksi A.2) terdapat jenis stigmasterol (m/z 395, 83), kampesterol (m/z 383, 161), dan β-sitosterol (m/z 397, 161).

ABSTRACT

Red Algae Eucheuma spinosum contains triterpenoid and steroid compounds which used as antioxidant, antibacterial, anticancer, etc. The purpose of this study was to know the separation result of triterpenoid and steroid compounds using slurry column chromatography by variation of column size and indentification using UV-Vis spectrophotometer, FTIR, and LC-MS/MS.

E. spinosum was extracted by maseration method using methanol solvent. The methanol extract was hydrolysized by 2N Hydrochloric Acid and partitioned using ethyl acetate solvent. Ethyl acetate fraction was analyzed by Lieberman Burchard reagent. Triterpenoid and steroid compounds in ethyl acetate fraction were separated using slurry column chromatography by variation of column size 1; 1,5; and 2 cm. The fraction result was monitored by Analitycal TLC. Triterpenoid and steroid isolate were identified by UV-Vis spectrophotometer, FTIR, and steroid isolate was identified by LC-MS/MS.

The separation result of triterpenoid and steroid compounds by slurry column chromatography was better on column size 1 cm which result in 4 single fraction groups consisted of 3 triterpenoid fraction (fraction A.4; A.6; and A.7) and 1 steroid fraction (fraction A.2). The identification result by UV-Vis spectrophotometer and FTIR of triterpenoid isolate (fraction A.4) was expected to be carbocyclic acid group (λmaks 206,9 nm) which has functional group OH, C=C, C=O carbocyclic acid, C-OH secondary, and geminal dimethyl. Triterpenoid isolate (fraction A.6 and A.7) was expected to be ester group (λmaks 204 nm) with functional group OH, C=C, C=O ester, C-OH primer, and geminal dimethyl. Steroid isolate (fraction A.2) was expected to be alcohol group (λmaks 203 nm) with functional group OH, C=C, C-OH secondary, and geminal dimethyl. The identification result by LC-MS/MS in steroid isolate (fraction A.2) found stigmasterol (m/z 395, 83), campesterol (m/z 383, 161), and β-sitosterol (m/z 397, 161).

مستخلص البحث

الطحالب الحمراء Eucheuma spinosum هى تحتوي على مركبات تريترفينويد وستيرويد التي تمكن استخدامها كمضاد للأكسدة، مضاد للجراثيم، مضادة للسرطان، الخ. يهدف هذا البحث إلى تحديد النتيجة تفصل المركبات تريترفينويد وستيرويد باستخدام اللوني العمود الرطب مع اختلاف الحجم العمود، وتحديد باستخدام المطياف الأشعة فوق بنفسجية المرئية، والتحويل الفورية تحت الحمراء، و اللونى السائل- التحليل الطيفي الثقيل.

E. spinosum تستخرج النقع باستخدام الميثانول. ثم تحللها الميثانول مع N٢ حمض الهيدروكلوريك وتقسيمها باستخدام الإيثيل الأسيتات. تختبر جزء الإيثيل الأسيتات مع كاشف ليبرمان بورشارد. تفصل المركبات تريترفينويد وستيرويد في جزء الإيثيل الأسيتات باستخدام اللوني العمود الرطب مع اختلاف الحجم العمود ١؛ ١٬٥ و٢ سم. ثم رصدتها برقيقة اللوني طبقة التحليلي. تحديد تريترفينويد وستيرويد باستخدام المطياف الأشعة فوق بنفسجية المرئية والتحويل الفورية تحت الحمراء، و تحديد العزلات الستيرويد مع اللونى السائل- التحليل الطيفي الثقيل.

نتيجة تفصل المركبات تريترفينويد وستيرويد أفضل اللوني العمود الرطب باستخدام الحجم العمود ١ سم الذي ينتج ٤ مجموعات الجزء يعنى ٣ جزءيات تريترفينويد (جزء A.٤؛ A.٦؛ و A.٧) و جزء سيترويد (جزء A.٢). نتيجة لتحديد المطياف الأشعة فوق البنفسجية مرئية و التحويل الفورية تحت الحمراء العزلات تريترفينويد (جزء A.٤) يزعم مجموعة حمض الكربوكسيلية (الطول الموجي الأقصى۹،٢۰٦ نانومتر) الذي يحوز المجموعات الوظيفيةOH ٬C=C ٬C=O حمض الكربوكسيلية C-OH الثانوي، وغيمينال ثنائي ميثيل. العزلات تريترفينويد ( جزء A.٦ و A.٧) يزعم مجموعة استر (الطول الموجي الأقصى ٢۰٤ نانومتر) مع المجموعات الوظيفيةOH ٬C=C ٬C=O استر، C-OH الأشعال، غيمينال ثنائي ميثيل. العزلات ستيرويد (جز A.٢) يزعم مجموعة الكحول (الطول الموجي الأقصى ٢۰٣ نانومتر) مع المجموعات الوظيفية OH٬ C=C٬ C-OH الثانوية، وغينمنال ثنائي ميثيل. نتائج تحديد مع اللونى السائل- التحليل الطيفي الثقيل في عزلات سيترويد (جزء A) هناك نوع من ستيغماستيرول (۸٣ ٣۹٥٬ m/z) كامفيستيرول (١٦١ ٣۸٣٬ m/z) β-سيتوستيرول (١٦١ ٣۹٧٬ m/z).