Pemisahan dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan identifikasi Senyawa Steroid menggunakan Lc-Ms pada Fraksi N-Butanol Alga Merah (Eucheuma Cottonii) perairan wongsorejo-banyuwangi

ABSTRAK

Eucheuma cottoni merupakan salah satu jenis rumput laut merah (alga merah) dari kelompok Rhodophyceae. Eucheuma cottonii memiliki banyak manfaat diantaranya adalah sebagai antivirus, antiinflamasi, sitotoksin, antijamur, antikanker, antioksidan, antibakteri, dan antidiabetik. Senyawa aktif yang diduga dominan dalam Eucheuma cottonii adalah senyawa steroid. Penelitian ini bertujuan untuk memisahkan senyawa steroid dari alga merah (Eucheuma cottonii) menggunakan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dan mengidentifikasinya menggunakan sepktrofotometer UV-Vis dan LC-MS.

Pemisahan steroid dilakukan dengan metode maserasi menggunakan pelarut metanol p.a. Selanjutnya ekstrak metanol dihidrolisis dengan HCl 2 N selama 1 jam. Hasil hidrolisat ditambahkan dengan natrium bikarbonat sampai diperoleh pH netral kemudian dipartisi menggunakan n-butanol untuk selanjutnya dilakukan uji fitokimia steroid menggunakan reagen Lieberman Buchard. Selanjutnya dilakukan pemisahan menggunakan KLT Analitik, KLT Preparatif, dan KLT 2 Dimensi untuk kemudian diidentifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis dan LC-MS.

Hasil yang diperoleh dari ekstraksi maserasi diperoleh rendemen sebesar 16,649 % dan randemen hasil partisi menggunakan pelarut n-butanol adalah 33,89 %. Uji fitokimia hasil partisi dengan n-butanol menunjukkan hasil positif terhadap steroid dengan ditandai adanya warna hijau. Pemisahan steroid menggunakan KLT analitik memberikan hasil bahwa perbandingan eluen n-heksana: etil asetat (17:3) merupakan eluen terbaik dengan menghasilkan 8 noda yang tidak berekor. Pemisahan dengan KLT preparatif menghasilkan 14 noda. Pada KLT 2 dimensi menghasilkan noda tunggal yaitu pada noda ke-6 dari KLT preparatif. Identifikasi senyawa steroid menggunakan UV-Vis menghasilkan panjang gelombang 203,9 nm dan 273 nm sedangkan hasil LC-MS positif menunjukkan adanya steroid jenis kolesterol, stigmasterol, β-sitosterol, dan kampesterol.

ABSTRACT

Eucheuma cottoni is one of species seaweeds (red algae) from Rhodophyceae group. Eucheuma cottoni has a lot of benefit such us as antivirus, antiinflamation, cytotoxic, antifungi, antioxidants, antibacterials, and antidiabetic. The dominant active compound wich estimate in Eucheuma cottoni is steroid compound. The aim of this research is separation of steroid compound from red algae (Eucheuma cottoni) using spectrophotometer UV-Vis and LC-MS.

Separation of steroid used maseration methode and methanol as solvent. Then the methanol extract was hydrolysis with hydrocloric acid 2 N during 1 hour. The result of hydrolysis added with natrium bicarbonate until pH neutral then partition used n-buthanol solvent and phytochemicals test used Liebermann Burchard reagent. Furthermore separation by Analitical Thin Layer Chromatography, Preparative Thin Layer Chromatography, and 2 Dimension Thin Layer Chromatography and identification used spectrophotometer UV-Vis and LC-MS.

The result from maseration methode has rendement 16,649 % and has rendement from partition with n-buthanol solvent 33,89 %. The phytochemicals test with n-buthanol solvent showed that positive steroid compound sign by green colour. Separation of steroid used Analitical Thin Layer Chromatography showed that the best eluen is n-hexane : ethyl acetate (17:3) with 8 spot without tail. Separation of preparative Thin Layer Chromatography showed that 14 spot. Separation of 2 dimension Thin Layer Chromatography showed that one spot from 6th preparative Thin Layer Chromatography. Identification of steroid compound with UV-Vis showed that wavelenght in 203,9 nm and 273 nm whereas identification of LC-MS showed that spesies steroid cholesterol, stigmasterol, β-sitosterol, and campesterol.

مستخلص البحث

يوشيما كوتونيي (Eucheuma Cottonii) هو أحد أنواع عشب البحرية الحمراء (الطحالب الحمراء) من مجموعة Rhodophyceae. يوشيما كوتونيي (Eucheuma Cottonii) له فوائد عديدة وهي كالحماية من الفيروسات والحماية للالتهابات، cytotoxins، مضاد للفطريات، مضاد للسرطان، مضاد للأكسدة، مضاد للجراثيم، ومضاد السكري. المركبات النشطة التي تزعمها مهيمنة في يوشيما كوتونيي (Eucheuma Cottonii) هو مركب الستيرويد. أما الغرض من هذا البحث لفصل مركبات الستيرويد من الطحالب الحمراء باستخدام كروماتوغرافي لافيس تيفيس (KLT) ويحددها باستخدام سفيكتروفوتومتير UV-Vis و لج-مس MS)- (LC.

يقام فصل الستيرويد بطريقة النقاعة باستخدام سنويا الميثانول .p.a ثم تحلل اكستراك ميتانول بمستخضر HCl 2 N ساعة. وأما نتائج تحليل فيزدد بيكربونات الصوديوم حتى يحصل pH محايد ثم تقسيم باستخدام ن بيوتانول ثم تجرب بالكيميائي النباتي الستيرويد باستخداك اختبار كاشف ليبرمان Buchard. ثم يقام الانفصال بكروماتوغرافي لافيس تيفيس KLT)) التحليلي و بكروماتوغرافي لافيس تيفيس KLT)) المحضرة و كروماتوغرافي لافيس تيفيس القياسين KLT)) لتحديدها لاحقا باستخدام سفيكتروفوتومتير أشعة UV-Visو لج-مس MS)- (LC.

أماالنتائج من طريقة النقاعة فيحصل رندامان ١٦,٦٤۹٪ و يؤدي القسم باستخدام المذيبات ن بيوتانول هو ٣٣,٨۹٪. أما نتائج التجربة الكيميائي النباتي مع التقسيم ن بيوتانول إيجابية لالمنشطات مع وجود ملحوظ في حلقات ملونة الخضراء. وكان فصل الستيرويد عن طريق النتائج التحليلية KLT أن نسبة شاطف ن الهكسان: خلات الإيثيل (١٧ : ٣) هو أفضل شاطف ليحصل على ثمان بقاع دون الذيل. والانفصال ب KLT المحضرة يحصل على أربع عشرة بقعا. أما في KLT 2 يحصل على بقعة واحدة أي في البقعة السادسة من KLT المحضرة. أما تحديد مركبات الستيرويد باستخدام أشعة فوق البنفسجية فيحصل على طول الموجي ٢٠٣,۹ نانومترا و ٢٧٣ نانومترا. أما نتيجة لج-مس MS)- (LC الإيجابية تدل على وجود أنواع ستيرويد الكولسترول و الستكماستيرول و البتاسيتوستيرول و الكامفيستيرول.