Aktivitas antioksidan isolat steroid hasil pemisahan kltp fraksi n-butanol mikroalga chlorella sp.

ABSTRAK:

Steroid merupakan metabolit sekunder yang mempunyai beragam bioaktivitas. Salah satu sumber alam yang memiliki kandungan steroid dengan konsentrasi yang tinggi adalah mikroalga. Jenis mikroalga Chlorella sp. merupakan mikroalga yang sudah banyak diteliti potensi kandungan steroidnya terutama sebagai senyawa antioksidan. Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui aktivitas antioksidan dari fraksi n-butanol dan isolat steroid hasil pemisahan KLTP fraksi n-butanol mikroalga Chlorella sp. serta untuk mengetahui hasil identifikasinya dengan spektrofotometer UV-Vis. Mikroalga Chlorella sp. dikultivasi dalam medium ekstrak tauge (MET) 4%. Biomassa kering mikroalga Chlorella sp. hasil kultivasi diekstrak dengan metode maserasi dalam pelarut metanol. Lalu, dihidrolisis dengan HCl 2N dan selanjutnya dipartisi menggunakan pelarut n-butanol. Hasil partisi diuji fitokimia menggunakan reagen Liebermann-Burchard. Setelah itu, senyawa steroid diisolasi dari fraksi n-butanol dengan metode KLTP menggunakan eluen campuran n-heksana:etil asetat (3,75:1,25). Fraksi n-butanol dan isolat steroid hasil KLTP diuji aktivitas antioksidan menggunakan metode DPPH untuk mengetahui nilai EC50 dan diidentifikasi menggunakan spektrofotometer UV-Vis. Hasil penelitian menunjukkan telah diperoleh spot yang diduga senyawa steroid pada hasil KLTP yang ditandai oleh munculnya spot berwarna hijau kebiruan pada nomor 10 dengan nilai Rf 0,83. Berdasarkan hasil pengujian aktivitas antioksidan, fraksi n-butanol memiliki nilai EC50 sebesar 11891 ppm, sementara isolat 10 KLTP memiliki nilai EC50 sebesar 57,62 ppm. Adapun hasil identifikasi fraksi n-butanol menunjukkan serapan pada panjang gelombang maksimum 202,1; 203,9; 229,0; 262,0; 269,0; 403,9; 668,1 nm. Sedangkan pada isolat 10 KLTP, muncul dua serapan pada panjang gelombang maksimum 229,0 dan 230,9 nm akibat adanya transisi π→π * yang berasal dari gugus C=C, dimana gugus ini merupakan karakteristik dari senyawa steroid.

ABSTRACT:

Steroids are secondary metabolites that have various bioactivity. One of the natural sources that contain a high concentration of steroids is microalgae. The Chlorella sp. is a microalgae that has been widely studied for steroid content, especially its potential as an antioxidant compound. The aims of this research are to determine the antioxidant activity of n-butanol fraction and steroid isolates from PTLC separation of n-butanol fraction of the microalgae Chlorella sp. and to find out the result of its identification using UV-Vis spectrophotometer. Microalgae Chlorella sp. was cultivated in bean sprouts extract medium 4%. The dry biomass of microalgae Chlorella sp. from cultivation was extracted by maceration method in methanol solvent. Then, it was hydrolyzed with HCl 2N and partitioned using n-butanol solvent. The n-butanol fraction was tested for phytochemical analysis using Liebermann-Burchard reagent. Furthermore, steroid compound was isolated from n-butanol fraction with PTLC separation using mixed eluent n-hexane:ethyl acetate (3,75:1,25). After that, n-butanol fraction and steroid compound that had been isolated from PTLC were tested its antioxidant activity using DPPH method to find out the EC50 value. Steroid isolate was identified using UV-Vis spectrophotometer. Research shows that there is a single spot which is suspected of being a steroid compound in the results of KLTP which is reported by a bluish green dot on number 10 with an Rf value of 0.83.Based on the result of the antioxidant activity test, n-butanol fraction had an EC50 value of 11891 ppm, while the isolate 10 from PTLC separation had an EC50 value of 57.62 ppm. The identification result of n-butanol fraction showed absorption at a maximum wavelengths of 202.1; 203.9; 229.0; 262.0; 269.0; 403.9; and 668,1 nm. Whereas in isolates 10 from KLTP separation, appeared absorption at maximum wavelengths of 229.0 and 230.9 nm caused by electronic transition π→π* from C=C functional group. This functional group is a characteristic of steroid compound.

مستخلص البحث:

الستيرويدات هي نواتج أيضية ثانوية لها نشاط بيولوجي مختلف. أحد المصادر الطبيعية التي تحتوي الستيرويد على تركيزات عالية من المنشطات هي الطحالب الدقيقة. أنواع الطحالب الدقيقة شلوريلا سف. (Chlorella sp.) هي طحالب دقيقة تمت دراستها على نطاق واسع لمحتواها من الستيرويد ، خاصة كمركب مضاد للأكسدة. تهدف هذه الدراسة إلى تحديد النشاط المضاد للأكسدة لجزء ن بوتانول وعزلات الستيرويد من فصل الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة عن جزء ن بوتانول من الطحالب الدقيقة شلوريلا سف. (Chlorella sp.) ونتائج التحديد باستخدام مقياس الطيف الضوئي(UV-Vis). الطحالب الدقيقة شلوريلا سف. (Chlorella sp.) يزرع في 4٪ مستخلص براعم الفول المتوسط. الكتلة الحيوية الجافة من شلوريلا سف. (Chlorella sp.) تم استخلاص نتائج الزراعة بطريقة النقع في مذيب الميثانول. بعد ذلك ، تم تحللها بالماء مع حمض الهيدروكلوريك 2 ن، ثم تم تقسيمها باستخدام ن بوتانول كمذيب. تم اختبار نتائج التقسيم للكيمياء النباتية باستخدام كاشف ليبرمان-بورشارد. بعد ذلك ، تم عزل مركبات الستيرويد بطريقة الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة باستخدام شطف مختلط من ن هكسان؛ إيثيل الأسيتات (3.75:1.25). تم اختبار جزء ن بوتانول وعزل الستيرويد الناتج عن الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة من أجل نشاط مضادات الأكسدة باستخدام طريقة 2،2 ثنائي فينيل 1 بيكريل هيدرازيل(DPPH) لتحديد قيمة (EC50) وتحديدها باستخدام مقياس الطيف الضوئي (UV-Vis). أظهرت النتائج أنه تم الحصول على عزلة ستيرويد واحدة في نتائج الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة والتي تميزت بظهور بقعة خضراء مزرقة بقيمة (Rf) تبلغ ١١٨٩١بناءً على نتائج اختبار نشاط مضادات الأكسدة ، كان لجزء ن بوتانول قيمة (EC50) قدرها ٥٧٬٦٢ جزء في المليون ، بينما كان لعزل الستيرويد الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة قيمة (EC50) 59.19 جزء في المليون. أظهرت نتائج تحديد جزء ن بوتانول امتصاص بطول موجي أقصى قدره 202.1 ؛ 203.9 ؛ 229.0 ؛ 262.0 ؛ 269.0 ؛ 403.9؛ و ٦٦٨,١ نانومتر. بينما في عزلات الستيرويد الناتجة عن فصل الفحص التحضيري للطبقة الرقيقة، ظهر امتصاص أكثر تحديدًا يشير إلى وجود مركبات ستيرويد بأطوال موجية قصوى تبلغ 229.0 و 230.9 نانومتر.